Cara Membuat Media TCBS Agar : Media untuk Vibrio (Cara 1)

TCBS : thiosulfat-Citrat-Bile-Sucrose

Bahan :

      1.       Akuades 1000 ml

      2.       Yeast Extract 5 gr

      3.     Meat peptone 5 gr

      4.     Sodium thiosulfat 10 gr
5.     Sodium Cholate 3 gr6.     Sodium Klorida 10 g
7.     Thymol Blue 0.04 gr
8.     Agar 14 gr
9.     Casein Peptone 5 gr
10.   Sodium Citrate 10 gr
11.    Bile Salts 5 gr
12.    Sucrose 20 gr13.    Ferric Citrate 1 gr14.    Bromothymol Blue 0,04 gr

             

      Alat :

Neraca Analitik

Spatula

Aluminium Foil

Gelas Ukur

Hotplate Stirrer

Magnetic Stirrer

Erlemeyer

Kapas

Akuades

Autoclave

Cara Pembuatan :

Siapkan 1 di dalam erlemeyer 2 liter

Letakkan di atas hotplate, nyalakan pada suhu 80-90oC. Aduk secara terus menerus dengan menggunakan magnetic stirrer.

Timbang 2 di atas aluminium foil.

Masukkan 2 ke dalam erlemeyer.

Timbang 3 di atas aluminium foil.

Masukkan 3 ke dalam erlemeyer.

Timbang 4 di atas aluminium foil.

Masukkan 4 ke dalam erlemeyer.

Timbang 5 di atas aluminium foil.

Masukkan 5 ke dalam erlemeyer.

Timbang 6 di atas aluminium foil.

Masukkan 6 ke dalam erlemeyer.

Timbang 7 di atas aluminium foil.

Masukkan 7 ke dalam erlemeyer.

Timbang 8 di atas aluminium foil.

Masukkan 8 ke dalam erlemeyer.

Timbang 9 di atas aluminium foil.

Masukkan 9 ke dalam erlemeyer.

Timbang 10 di atas aluminium foil.

Masukkan 10 ke dalam erlemeyer.

Timbang 11 di atas aluminium foil.

Masukkan 11 ke dalam erlemeyer.

Timbang 12 di atas aluminium foil.

Masukkan 12 ke dalam erlemeyer.

Timbang 13 di atas aluminium foil.

Masukkan 13 ke dalam erlemeyer.

Timbang 14 di atas aluminium foil.

Masukkan 14 ke dalam erlemeyer.

Apabila campuran telah larut homogen, naikkan suhu sampai mendidih.

Tutup erlemeyer dengan kapas.

Bungkus dengan kertas.

Masukkan ke dalam autoclave, nyalakan autoclave.

Setting autoclave pada suhu 121oC, 15 menit. **)

Setelah Autoclave mati, diamkan sampai suhu turun mencapai 100oC (tekanan udara normal).

Buka autoclave, keluarkan larutan yang telah steril.

langsung gunakan, atau simpan di dalam tempat yang dingin (kulkas).

Penggunaan :
Tuangkan media ke cawan petri.
Olesi dengan sampel.
Inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 35oC.
Koloni Vibrio cholerae akan berbentuk besar, halus, berwarna kuning atau kuning kecoklatan, diameter 2-3mm.

Koloni Vibrio parahemolyticus akan tidak berwarna dengan warna hijau di tengahnya, diameter 3-4 mm.

Koloni Vibrio alginolyticus akan besar dan berwarna kuning.

Catatan :

*) Pemanasan yang terlalu tinggi akan menyebabkan campuran mendidih dan meluap; selain itu zat terlarut yang berada di dasar erlemeyer akan mengerak.

**) Jika autoclave tidak memiliki setting otomatis, maka nyalakan autoclave sampai suhu mencapai 121oC. Kemudian diamkan dalam suhu tersebut selama 15 menit, lalu matikan.

Referensi : Medium Analisis mikroorganisme Kultur (Isolasi dan Kultur). Dr. Ratu Safitri dan Sinta sasika Novel. 2010.